1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了出口糧谷中三環(huán)唑殘留量檢驗(yàn)的抽樣、制樣和氣相色譜測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于出口大米中三環(huán)唑殘留量的檢驗(yàn)。

2 抽樣和制樣

2.1 檢驗(yàn)批

以不超過4 000袋(200 t)為一檢驗(yàn)批。

同一檢驗(yàn)批的商品應(yīng)具有相同的特征，如包裝、標(biāo)記、產(chǎn)地、規(guī)格和等級等。

2.2 抽樣數(shù)量

按式(1)計算抽取袋數(shù)：

式中：N—全批袋數(shù)；

a—抽樣袋數(shù)。

注：a值取整數(shù)，小數(shù)部分向前進(jìn)位為整數(shù)。

2.3 抽樣工具

2.3.1 金屬單管取樣器：全長55 cm(包括手柄)，直徑1.5～2.0 cm，溝槽長度應(yīng)超過袋對角線長度的一半。

2.3.2 取樣鏟。

2.3.3 分樣板。

2.3.4 樣品筒(袋)：可密封。

2.3.5 分樣布或適用鋪墊物。

2.4 抽樣方法

2.4.1 倒包抽樣：從堆垛的各部位隨機(jī)抽取2.2規(guī)褪的應(yīng)抽樣件數(shù)的10％(每批一般不少于3袋)，將袋口縫線全部拆開，平置于分樣布或其他潔凈的鋪墊物上，雙手緊握袋底兩角，提起約成45^o傾角，倒拖約1m，使袋內(nèi)貨物全部倒出。檢查袋內(nèi)和袋間品質(zhì)是否均勻。確認(rèn)情況正常后，用取樣鏟隨機(jī)在各部位抽取樣品，立即將樣品倒入盛樣器內(nèi)。每袋抽取的樣品量應(yīng)基本一致。

2.4.2 袋內(nèi)抽樣：按2.2規(guī)定的應(yīng)抽樣袋數(shù)的90%，在堆垛四周上、中、下各層以曲線形走向隨機(jī)抽取。將取樣器(2.3.1)管槽朝下，從每袋一角依斜對角方向插入袋內(nèi)，然后將管槽旋轉(zhuǎn)朝上，抽出取樣器，立即將樣品倒入盛樣容器內(nèi)。每袋抽取的樣品量應(yīng)與2.4.1基本一致。

每批樣品總量應(yīng)不少于4 kg。

2.4.3 大樣縮分：集中袋內(nèi)和倒包抽樣所取全部樣品，倒于分樣布上，用分樣板按四分法縮分出樣品不少于2 kg，盛于樣品筒內(nèi)，加封后標(biāo)明標(biāo)記并及時送交實(shí)驗(yàn)室。

2.5 試樣制備

將樣品按四分法縮分至1 kg，全部磨碎并通過20目篩。混勻，均分成兩份，分別裝入潔凈的容器內(nèi)作為試樣，密封，標(biāo)明標(biāo)記。

2.6 試樣保存

將試樣于-5℃以下避光保存。

注：在抽樣和制樣的操作過程中，必須防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。

3 測定方法

3.1 方法提要

試樣中殘留的三環(huán)唑用丙酮振蕩提取，提取液經(jīng)濃縮后，過中性氧化鋁柱凈化，二氯甲烷-甲醇溶液洗脫。洗脫液經(jīng)濃縮、定容后，用配有氮磷檢測器的氣相色譜儀測定，外標(biāo)法定量。如有必要，用色譜-質(zhì)譜檢測器法來確證。

3.2 試劑和材料

除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。

3.2.1 甲醇：重蒸餾。

3.2.2 二氯甲烷：重蒸餾。

3.2.3 丙酮：重蒸餾。

3.2.4 二氯甲烷-甲醇(99+1)溶液。

3.2.5 無水硫酸鈉：于650℃灼燒4h，貯于密封容器中備用。

3.2.6 中性氧化鋁：于650℃灼燒4 h,貯于密封容器中，使用前在130℃下烘2 h,貯于干燥器內(nèi)冷卻備用。

3.2.7 三環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99％。

3.2.8 三環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確稱取適量的三環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品，用丙酮配制成濃度為1.0 mg /mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。再根據(jù)需要用丙酮稀釋儲備液，配成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

3.3 儀器和設(shè)備

3.3.1 氣相色譜儀并配有氮磷檢測器和質(zhì)譜檢測器。

3.3.2 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。

3.3.3 震蕩器。

3.3.4 中性氧化鋁柱：15cm×0.6cm(內(nèi)徑)，帶有10 mL儲液斗，柱內(nèi)裝2g中性氧化鋁，上下各填0.5 cm高的無水硫酸鈉。

3.3.5 微量注射器：10 uL。

3.3.6 離心管：50 mL，具磨口塞。

3.4 測定步驟

3.4.1 提取

稱取約20 g試樣(精卻至0.1g)，置于一250 mL錐形瓶中。加入50 mL丙酮，震蕩提取1h，將上清液濾入100 mL容量瓶中。殘?jiān)儆?0 mL丙酮提取一次。合并提取液于容量瓶中，并用丙酮定容至刻度。

準(zhǔn)確移取10 mL提取液于一50 mL離心管中。于40℃水浴中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入2 mL二氯甲烷。

3.4.2 凈化

在中性氧化鋁柱中，加入10 mL二氯甲烷，調(diào)節(jié)流速約為1 mL/min。待液面降至無水硫酸鈉層時，將上述的濃縮液加入柱中。待液面降至無水硫酸鈉層時，用5 mL二氯甲烷洗滌器皿，加入柱內(nèi)，繼用5 mL二氯甲烷淋洗，待液面降至無水硫酸鈉層時，棄去流出液。隨后立即用35 mL二氯甲烷-甲醇(99+1)溶液洗脫。收集35 mL洗脫液于50 mL離心管中，在40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，準(zhǔn)確加入1 mL丙酮以溶解殘?jiān)９庀嗌V測定。

3.4.3 測定

3.4.3.1 氣相色譜條件

a)色譜柱：HP-SMS, 30 m×0.25 mm(內(nèi)徑)，膜厚0.25 um，或相當(dāng)者；

b)載氣：氮?dú)猓兌?ge;99.99％,1 mL/min;

c)輔助氣：氮?dú)猓兌?ge;99.99％, 20 mL/min ;

d)氫氣：3.5 mL/min；

e)空氣：100 mL/min;

f)色譜柱溫度：215℃；

g)進(jìn)樣口溫度：270℃;

h)檢測器溫度：320℃；

i)進(jìn)樣量：1 uL;

J)進(jìn)樣方式：無分流，1 min后開閥。

3.4.3.2 氣相色譜測定

根據(jù)樣液中被測農(nóng)藥含量情況，選定峰高相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和待測樣液中農(nóng)藥的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。對標(biāo)準(zhǔn)工作液與樣液應(yīng)等體積參插進(jìn)樣測定。在上述色譜條件下，三環(huán)唑保留時間約為8.5 min。

3.4.4 氣相色譜-質(zhì)譜確證

3.4.4.1 氣相色譜-質(zhì)譜條件：

a)色譜柱：HP- 5MS, 30 m×0.25 mm(內(nèi)徑)，膜厚0.25 um，或相當(dāng)者；

b)載氣：氦氣，純度≥99.99％, 0.8 mL/min;

c)色譜柱溫度：50℃保持1 min，以10℃/min升溫至250℃，保持15 min;

d)進(jìn)樣口溫度：270℃;

e)色譜一質(zhì)譜接口溫度：280℃;

f)進(jìn)樣量：2 uL;

g)進(jìn)樣方式：無分流，1 min后開閥；

h)電離能量:70 eV;

i)電離方式：El;

j)電子倍增器電壓：自動調(diào)諧值加200 V ;

k)測定方式：離子監(jiān)測方式；

1)監(jiān)測離子(m/z)：189，162 amu;

m)溶劑延遲：5 min。

3.4.4.2 質(zhì)譜確證試驗(yàn)

對標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣液均按3.4.4.1規(guī)定的條件進(jìn)行測定。如果樣液與標(biāo)準(zhǔn)溶液在相同保留時間有峰出現(xiàn)，則用質(zhì)譜圖對其確證。在上述色譜條件下，三環(huán)唑保留時間約為29 min。

3.4.5空白試驗(yàn)

除不稱取試樣外，均按上述測定步驟進(jìn)行。

3.5結(jié)果計算和表述

用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按式(2)計算試樣中三環(huán)唑的殘留含量：

式中：X—試樣中三環(huán)唑殘留含量，mg/kg;

h—樣液中三環(huán)唑的峰高，mm;

h_s—標(biāo)準(zhǔn)工作液中三環(huán)唑的峰高，mm;

c—標(biāo)準(zhǔn)工作液中三環(huán)唑的濃度，ug /mL ;

V—樣液終定容體積，mL ;

m—終樣液所代表的試樣量，g。

注：計算結(jié)果需將空白值扣除。

4 測定低限、回收率

4.1 測定低限

本方法測定低限為0.2 mg/kg。

4.2 回收率

大米中三環(huán)唑的添加濃度及其回收率的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：

在0.20 mg /kg時，回收率為91.0％；

在2.0 mg/kg時，回收率為91.0％;

在5.0 mg/kg時，回收率為93.8%。